Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐适配

从第一次消失家兔自身血清到消失1标准型癌症医学症状的令人满意率在儿童时期就有很好的所述，多个家兔自身血清阳性的儿童中所有70%在血清切换后10年内患有癌症，而随访15年的儿童这一百分比降低到84%。相比于之下，九成医学1标准型癌症一半以上的标准型1标准型癌症的复发前提还没得到充分的深入研究。

越来越多的人开始适用分期系统来判别1标准型癌症的令人满意：个基底在消失多种家兔自身血清时离开第1过渡期，消失浓度异常时离开第2过渡期，消失症状时离开第3过渡期。一些多发家兔自身血清阳性的个基底，在1期和2期，令人满意快速，并发展为复发的1标准型癌症。我们之后所述了一第一组在首次检测到多种家兔自身血清采样后至少10年无癌症的极慢令人满意者，这第一组病患者总数少，但特征非常明确。随后，我们发现家兔自身复合物特异性CD8+T肝细胞化学反应当在令人满意比快速的病患者中所原则上不实际上，但在全面性复发和长期实际上的癌症病患者中所很不易检测到。这可能表明，与令人满意病患者相比于，这些病患者自身免疫化学反应当的通气增强。

最初深入研究表明，尽管通气性T肝细胞(Treg)数量但会，但癌症病患者实际上一些功能性缺陷，其中所包含对IL-2的化学反应当战斗能力降低。此外，癌症病患者中所的震荡CD4+T肝细胞可能对通气颇具抵抗性，表现为震荡T肝细胞的可抑制逼近，其本质显现出的Treg和基底外显现出的可借Treg，以及复合物经历的CD4+T肝细胞中所IL-2化学反应当逼近。本深入研究的最终目标是所述了CD4+通气性T肝细胞(Treg)在在在极比快速令人满意者中所的特征，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以老年人为基础的纵向深入研究，在21岁以下确诊的病患者亲属中所检查1标准型癌症的危险因素。我们之后所述了长期比快速令人满意者的特征，他们保持稳定多重家兔自身血清阳性超过10年，但没消失癌症的医学症状，慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无癌症并愿意发放大量血液采样的比快速令人满意者纳入T和B肝细胞功能性比对。在现阶段的深入研究中所，8名慢令人满意者(SP第一组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身血清阳性。所有的参与者都正处于1标准型癌症令人满意的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身血清对某些复合物的阳性化学反应当，然而，一名病患者仍然正处于2期至少6年，但没消失医学症状，一名病患者被诊断为癌症，该人脑72岁，在热带植物实验采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中所对该NAD顺利完成了单独评估。分离外周血单个核子肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞法术和T肝细胞可抑制试验评估NAD中所Treg的振幅、表标准型和功能性。适用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)顺利完成无行政官员聚类比对，评估Treg表标准型。

结果：与肥胖NAD相比于，来自慢令人满意基底的失忆CD4+T肝细胞的行政官员聚类说明了，这样的话的失忆CD4+ Treg振幅降低，与糖皮质激素可借的TNFR相关蛋白(GITR)解读降低有关。一名HbA1c升高的病患者与令人满意比快速者和匹配的印证第一组相比于，Treg谱有所完全相同。功能性比对表明，与肥胖NAD相比于，来自比快速令人满意基底的Treg介导的CD4+震荡T肝细胞可抑制显著毁坏。表现为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134解读的可抑制降低。

平面图1 深入的表标准型比对说明了，CD4+Treg亚标准型在慢令人满意队列中所降低。由FlowSOM分解的Treg过道，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据上面物解读解剖出10个元簇:失忆T肝细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T肝细胞;HLA-DR + GITR +失忆T肝细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)适用9个完全相同Treg上面分解的10个元簇的MST。每个结点代表人一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在结点第一组附近可视。每个结点中所的糕点平面图声称单个上面的解读级别。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整基底上面解读。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)分解平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比金属量为每个metacluster箱子线平面图(金属量> 0.05%)确定为HD和SP第一组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T肝细胞(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T肝细胞(l)。绿色红色代表人人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩化验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 适用CITRUS的预测模标准型证实，Treg振幅的降低是令人满意比快速的标志。分级奈斯(a - f)和柑橘比对(g-k)尤其SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的关联性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的代表人性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利完成分离，演示FlowSOM群基底。(b) HD(横纹)和SP(白点)第一组以及NADSP 606(绿色)中所CD25+ cd127的振幅概要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的箱子线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读数值可视，箭头值得注意的簇被识别为SP和HD队列之间的完全相同。(j)箱子线平面图说明了了在SP(白点)和HD(灰点)第一组中所，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相比金属量(百分比)。(k)直方平面图说明了每个簇的表标准型(粉红色)和Treg上面相比解读与背景解读(粉红色);上列，磁盘Treg_3;一个大一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中所上面的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩化验

平面图3 与肥胖献血者相比于，令人满意比快速者失忆treg的GITR降低。每个失忆CD4+T肝细胞元簇(失忆T肝细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T肝细胞;HLA-DR + GITR +失忆T肝细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个解读上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热平面图(sp606不包含在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR解读相联，说明了直方平面图(c)和概要平面图(d)。Wilcoxon配对大写字母秩和化验，p< 0.07(绿色)所有NAD包含，p< 0.05(粉红色)NADSP 606和匹配的HD不包含在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR解读，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(绿色)相联，说明了直方平面图(e)和概要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写字母秩化验

平面图4 来自比快速令人满意的CD4+ treg肝细胞控制震荡CD4+T肝细胞的战斗能力降低。SP第一组用粉红色的线和红色声称，HD第一组用黑色的线和红色声称，绿色的线/红色声称NADsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按捕捉到的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，培植3同月顺利完成流式肝细胞法术检测。(a-d)与CD4+这样的话者相比应当的treg培植(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培植。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE可抑制百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制百分比。适用阳性印证(这样的话的响应当肝细胞不含treg)计算可抑制百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

平面图5 震荡CD4+T肝细胞对比快速令人满意的T肝细胞酪氨酸的可抑制更寻常。SP第一组用粉红色的线和红色声称，HD第一组用黑色的线和红色声称，绿色的线/红色声称NADsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按捕捉到的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，培植3同月顺利完成流式肝细胞法术(CD25反染)和巨噬肝细胞比对。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培植。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE可抑制百分比(b)。(c,d) CD25可抑制百分比(c)和CD134可抑制百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中所的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

结论：我们得出的结论是，来自比快速令人满意子的酪氨酸失忆CD4+Treg在GITR解读中所得到了延展和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1标准型癌症风险个基底中所的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28