Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1同型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肝巨噬细胞诱发球细胞内到显现1同型乳癌药理学腹泻的成果百余人在学童时期就有很好的揭示，多个肝巨噬细胞诱发球细胞内基本特征性的学童之则有70%在血清转换后10周内患上乳癌，而随访15年的学童这一人口比例缩减到84%。相比较之下，占药理学1同型乳癌一半以上的同型1同型乳癌的发病选择性还没获取充分的研究工作。

愈发多的人开始适用分段系统来假定1同型乳癌的成果：生殖在显现多种肝巨噬细胞诱发球细胞内时转至第1期中，显现血糖极其时转至第2期中，显现腹泻时转至第3期中。一些多发肝巨噬细胞诱发球细胞内基本特征性的生殖，在1期和2期，成果速度快，并蓬勃发展为发病的1同型乳癌。我们以后揭示了一组在首次样品到多种肝巨噬细胞诱发球细胞内比对后据估计10年无乳癌的极快成果者，这组病征人数少，但基本特征非常明确。随后，我们发现肝巨噬细胞自身抗原特异性CD8+T巨噬细胞催化将在成果减快的病征之中整体不实际上，但在近期发病和长期实际上的乳癌病征之中很更易样品到。这可能得出论点，与成果病征相比较，这些病征诱发催化将的调控减快。

20世纪研究工作得出论点，尽管调控性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但乳癌病征实际上一些功能缺陷，其之中包括对IL-2的催化将能力也降低。此外，乳癌病征之中的现象将CD4+T巨噬细胞可能对调控不够具抵抗性，表现为现象将T巨噬细胞的其会消退，自然现象产生的Treg和微外产生的其会Treg，以及抗原经历的CD4+T巨噬细胞之中IL-2催化将消退。本研究工作的旨在是揭示了CD4+调控性T巨噬细胞(Treg)在一小群极减快成果者之中的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以这群人系统化的纵向研究工作，在21岁以下确诊的病征亲属之中检查1同型乳癌的危险因素。我们以后揭示了长期减快成果者的基本特征，他们保持多重肝巨噬细胞诱发球细胞内基本特征性最多10年，但没显现乳癌的药理学腹泻，快性或非开展性诱发。随后，10名暂时保持无乳癌并愿意给予大量血液比对的减快成果者归入T和B巨噬细胞功能量化。在目前的研究工作之中，8名快成果者(SP组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝巨噬细胞诱发球细胞内基本特征性。所有的发起者都西北面1同型乳癌成果的1期，尽管一些人随后耗尽了肝巨噬细胞诱发球细胞内对某些抗原的基本特征性催化将，然而，一名病征已经西北面2期据估计6年，但没显现药理学腹泻，一名病征被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集实验比对时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据量化之中对该供微开展了单独指标。分开外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，改用多参数流式巨噬细胞奥义和T巨噬细胞其会试验指标供微之中Treg的频谱、表同型和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和紧接著)开展无监督聚类量化，指标Treg表同型。

结果：与有益供微相比较，来自快成果微的思绪CD4+T巨噬细胞的监督聚类推测，酪氨酸的思绪CD4+ Treg频谱缩减，与糖皮质激素其会的TNFR涉及细胞内(GITR)传达缩减有关。一名HbA1c下降时的病征与成果减快者和匹配的控制组相比较，Treg磬各有各不相同。功能相比较较，与有益供微相比较，来自减快成果微的Treg内源性的CD4+现象将T巨噬细胞其会明显破损。表现为对现象将CD4+T巨噬细胞CD25和CD134传达的其会缩减。

由此可知1 深入的表同型量化推测，CD4+Treg亚同型在快成果队列之中缩减。由FlowSOM转化成的Treg室，组织起来在来自所有供微的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上标物传达比对出10个元簇:思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个各不相同Treg上标转化成的10个元簇的MST。每个键值代表一个一个大(100个一个大)，不够大的元一个大(10个元一个大)在键值组周围上色。每个键值之中的糕由此可知透露单个上标的传达分级。(b)每个元聚类的热由此可知，以推测整微上标传达。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)转化成由此可知，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对于数量级为每个metacluster装新线由此可知(数量级> 0.05%)确定为HD和SP组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T巨噬细胞(l)。浅橙色红色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 适用CITRUS的预测模同型证实，Treg频谱的缩减是成果减快的标志。分级依赖型(a - f)和果树量化(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的代表性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR传达开展分开，模拟FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(布氏)组以及供微SP 606(浅橙色)之中CD25+ cd127的频谱摘要由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型叔父集的装新线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达准确度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列之间的各不相同。(j)装新线由此可知推测了在SP(布氏)和HD(灰点)组之中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对于数量级(人口比例)。(k)直方由此可知推测每个簇的表同型(蓝色)和Treg上标相对于传达与背景传达(橙色);上列，闪存Treg_3;下面动身，闪存Treg_4。背景与所有其他簇之中上标的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知3 与有益献血者相比较，成果减快者思绪treg的GITR缩减。每个思绪CD4+T巨噬细胞元簇(思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个传达上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(浅橙色)的FlowSOM GITR传达串联，推测直方由此可知(c)和摘要由此可知(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(浅橙色)所有供微包括，p< 0.05(橙色)供微SP 606和匹配的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR传达，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(浅橙色)串联，推测直方由此可知(e)和摘要由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知4 来自减快成果的CD4+ treg巨噬细胞控制现象将CD4+T巨噬细胞的能力也降低。SP组用橙色的新线和红色透露，HD组用黑色的新线和红色透露，浅橙色的新线/红色透露供微sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被上标为CFSE, Treg按观察的人口比例催化物。用抗CD3 /28微珠诱导巨噬细胞，养成3当晚开展流式巨噬细胞奥义样品。(a-d)与CD4+需要的话者相对于应将的treg养成(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者养成。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE其会多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的其会多于。适用基本特征性对照(酪氨酸的响应将巨噬细胞不含treg)计算其会多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 现象将CD4+T巨噬细胞对减快成果的T巨噬细胞诱导的其会不够极端。SP组用橙色的新线和红色透露，HD组用黑色的新线和红色透露，浅橙色的新线/红色透露供微sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel上标，treg按观察的人口比例催化物。用抗CD3 /28微珠诱导巨噬细胞，养成3当晚开展流式巨噬细胞奥义(CD25反染)和巨噬细胞因叔父量化。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同养成。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE其会百分百余人(b)。(c,d) CD25其会百分百余人(c)和CD134其会百分百余人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成之中的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得出的论点是，来自减快成果叔父的诱导思绪CD4+Treg在GITR传达之中获取了扩展和丰富，务实了进一步研究工作Treg在1同型乳癌安全性生殖之中的环境因素的不够进一步。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28