Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病症状进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现去甲自身免疫到显现1标准型白血病针灸疼痛的成效领军在学童以前就有很好的描绘，多个去甲自身免疫无症状的学童当；还有70%在血清转换后10天内患上白血病，而随访15年的学童这一数目减小到84%。一般来说于之下，分之二针灸1标准型白血病一半以上的标准型1标准型白血病的中风机制还从未给予充分的比对。

越来越多的人开始常用分期控制系统来界定1标准型白血病的成效：母质在显现多种去甲自身免疫时离开第1阶段性，显现血糖异常时离开第2阶段性，显现疼痛时离开第3阶段性。一些多发去甲自身免疫无症状的母质，在1期和2期，成效较快，并转变为中风的1标准型白血病。我们前描绘了各别在首次监测到多种去甲自身免疫采样后将近10年无白血病的亦然快成效者，这两组病患人数多于，但特性非常明确。随后，我们注意到去甲自身复合物特异性CD8+T细胞膜反应当在成效缓快的病患当中大质上不实际上，但在近期中风和经常性实际上的白血病病患当中很容易监测到。这似乎说明，与成效病患一般来说于，这些病患性疾病反应当的平衡大幅提高。

以前比对说明，尽管平衡性T细胞膜(Treg)数量显现异常，但白血病病患实际上一些功能性局限性，其当中包括对IL-2的反应当控制能力减多于。此外，白血病病患当中的振荡当CD4+T细胞膜似乎对平衡更是为重要抵抗性，表现为振荡当T细胞膜的正向减弱，自然产生的Treg和质外产生的正向Treg，以及复合物年中的CD4+T细胞膜当中IL-2反应当减弱。本比对的借以是描绘了CD4+平衡性T细胞膜(Treg)在一小群亦然缓快成效者当中的特性，他们的平均年龄两组为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX比对是一项以人群为基础的纵向比对，在21岁表列肺癌的病患亲属当中核查1标准型白血病的致命主因。我们前描绘了经常性缓快成效者的特性，他们保持多重去甲自身免疫无症状超过10年，但从未显现白血病的针灸疼痛，快性或非进行时性性疾病。随后，10名在此之后保持无白血病并愿意提供大量肝脏采样的缓快成效者纳入T和B细胞膜功能性比对。在现阶段的比对当中，8名快成效者(SP两组)，当中位年龄两组43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的去甲自身免疫无症状。所有的发起者都始终保持1标准型白血病成效的1期，尽管一些人随后无法控制了去甲自身免疫对某些复合物的过敏原当，然而，一名病患已经始终保持2期将近6年，但从未显现针灸疼痛，一名病患被病因为白血病，该受试者72岁，在采集实验采样时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据比对当中对该丝氨酸进行时了单独评连锁反应。分离出来外周血单个连锁反应细胞膜(PBMCs)，采用多数值流式细胞膜法术和T细胞膜正向试验评连锁反应丝氨酸当中Treg的频领军、表标准型和功能性。常用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、密切相关和复归)进行时无督导聚类比对，评连锁反应Treg表标准型。

结果：与卫生丝氨酸一般来说于，来自快成效质的心灵CD4+T细胞膜的督导聚类辨识，激活的心灵CD4+ Treg频领军减小，与糖皮质激素正向的TNFR相关亚基(GITR)解读减小有关。一名HbA1c消退的病患与成效缓快者和匹配的相来得两组一般来说于，Treg谱有所不同。功能性比对说明，与卫生丝氨酸一般来说于，来自缓快成效质的Treg酪氨酸的CD4+振荡当T细胞膜正向相比受损。表现为对振荡当CD4+T细胞膜CD25和CD134解读的正向减小。

由此可知1 透彻的表标准型比对辨识，CD4+Treg亚标准型在快成效数据流当中减小。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标示物解读深入研究出10个元簇:心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)常用9个不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个数据流都有一个空降兵(100个空降兵)，更是大的元空降兵(10个元空降兵)在数据流两组附近剪裁。每个数据流当中的饼由此可知坚称单个标示的解读级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以辨识整质标示解读。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成由此可知，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster罐终点站由此可知(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞膜(l)。粉红色带子都有捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩核查。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 常用CITRUS的预测模标准型证实，Treg频领军的减小是成效缓快的徽标。分级去亦然化(a - f)和柑橘比对(g-k)来得SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的不同。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的都有性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读进行时分离出来，建模FlowSOM社会性。(b) HD(白点)和SP(星点)两组以及丝氨酸SP 606(粉红色)当中CD25+ cd127的频领军汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去亦然化子集的罐终点站由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，斜终点站引人注目的簇被识别系统为SP和HD数据流中间的不同。(j)罐终点站由此可知辨识了在SP(星点)和HD(灰点)两组当中，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(数目)。(k)直方由此可知辨识每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标示一般来说解读与氛围解读(黄色);上列，文件系统Treg_3;下面一行，文件系统Treg_4。氛围与所有其他簇当中标示的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩核查

由此可知3 与卫生献血者一般来说于，成效缓快者心灵treg的GITR减小。每个心灵CD4+T细胞膜元簇(心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个解读标示的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的解读热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇当中所有HD(黄褐色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR解读接在，辨识直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和核查，p< 0.07(粉红色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(黄色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR解读，从分级去亦然化，从所有HD(黄褐色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)接在，辨识直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩核查

由此可知4 来自缓快成效的CD4+ treg细胞膜控制振荡当CD4+T细胞膜的控制能力减多于。SP两组用黄色的终点站和带子坚称，HD两组用银色的终点站和带子坚称，粉红色的终点站/带子坚称丝氨酸sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(应当答者)被标示为CFSE, Treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠激活细胞膜，培养出来3天后进行时流式细胞膜法术监测。(a-d)与CD4+应当答者一般来说应当的treg培养出来(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应当答者培养出来。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE正向比领军(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的正向比领军。常用无症状相来得(激活的鼓动当细胞膜另有treg)量度正向比领军。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

由此可知5 振荡当CD4+T细胞膜对缓快成效的T细胞膜激活的正向更是敏感。SP两组用黄色的终点站和带子坚称，HD两组用银色的终点站和带子坚称，粉红色的终点站/带子坚称丝氨酸sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(应当答者)被cfsel标示，treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠激活细胞膜，培养出来3天后进行时流式细胞膜法术(CD25反染)和细胞膜因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606应当答者共同培养出来。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE正向百分领军(b)。(c,d) CD25正向百分领军(c)和CD134正向百分领军(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来当中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

事实：我们事实的事实是，来自缓快成效子的激活心灵CD4+Treg在GITR解读当中给予了扩大和丰富，突显了进一步比对Treg在1标准型白血病致命性母质当中的系统性的必要性。

标题出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28